三氯化铝在水体中肠道病毒浓缩中的应用
肠道病毒(Enterovirus,EV)是影响人体健康的重要病原微生物之一,水体中的肠道病毒必须通过有效的浓缩才能提高检出率。本法依据絮凝原理,采用三氯化铝和氯化钠联合絮凝,有利于水中肠道病毒的浓缩,方法操作简便,结果满意。
1材料与方法
1.1絮凝与浓缩
取含Polil病毒水样1L,加入0.05M三氯化铝溶液10ml,10g氯化钠充分混匀后,置入冰箱过夜。次日弃去上清液,沉淀物3000r/min离心20分钟,离心后浓缩物加入PH11.4的甘氨酸EDTA缓冲液5ml,使絮凝块溶解。然后调整PH至7.4,并加入抗菌素适量,最终体积约6.5ml。取含甲肝病毒水样200ml,用上述方法絮凝浓缩,最终体积约1ml。
1.2病毒检测
Polil病毒检测,以浓缩物按10倍递增稀释,每个稀释度接种4管BGM细胞,连续观察细胞病变7天,以TCD50表示病毒滴度,并计算回收率。甲肝病毒检测,以浓缩物接种FRhk4细胞,33℃21天,用免疫萤光法检测存活。
1.3检测样品
采用脱氯自来水加入一定量的Polil病毒和天然海水加入一定量的甲肝病毒 作为检测样品。
2 结果与讨论
含Polil病毒水样经絮凝浓缩后, 检测结果的回收率为 83.74%~96.14%, 平均回收率为 92%, 见表 1。
含甲肝病毒水样经絮凝浓缩后, 在培养一个月期间内, 定期检查病毒存活情况, 同样获得满意结果。
有报道国外曾采用氯化铝浓缩自来水Polil 病毒, 回收率为 71%化铝2氯化钠絮凝浓缩法, 把回收率提高到92%。由于本法操作简便, 不需特殊的试剂和设备, 适合于基层实验室使用。