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芹菜甲素对三氯化铝致老年性痴呆模型大鼠的干预作用

返回列表 发布日期:2016年11月19日 来源:www.sanlvhualv.com 浏览:3806

芹菜甲素是从伞形科植物芹菜中提取分离的有效成分,现代药理研究表明芹菜素有降压、镇静、抑菌等作用。但目前对其促智作用研究较少,本文采用三氯化铝所致的老年性痴呆大鼠模型研究了芹菜甲素的促智及抑制含淀粉样前体蛋白阳性神经元生成的作用。

实验方法:

1、三氯化铝致老年性痴呆模型的建立

取健康大鼠40只,随机分为4组:正常组、模型组及个给药组,每组10只。除正常组外其余各组灌服三氯化铝500mg/(kg.d),正常组灌服等容积的蒸馏水,第30天时用大鼠避暗法考察痴呆形成程度,待模型形成后,给药组灌服三氯化铝的同时给予高、低浓度的芹菜甲素,模型组和空白组给予蒸馏水,1mL/100g,1次/d,连续灌服75d。第75天开始进行跳台试验,第80d天处死大鼠,测定背海马和齿状回内含淀粉样前体蛋白神经元的个数。

2、痴呆大鼠学习记忆能力的测定一跳台法

跳台箱底部为电栅板箱内有一个高10cm的平台。条件刺激为铃声,非条件刺激为足底电击。其程序为铃声5s,继之以电击10s,间隔20s。大鼠受到电击跳上平台称之为被动回避反应;听到铃声而未遭到电击之前跳上平台称之为主动回避反应。每天训练10次,记录主动回避反应的次数。

3、大鼠背海马中含淀粉样前提蛋白神经元计数法

大鼠以20%乌拉坦麻醉后,打开胸腔灌流针头自左心室插入主动脉,先以0.9%氯化钠溶液冲洗血液,以输液器注4%入多聚甲醛。固定后立即取出大脑,置4%多聚甲醛中固定1~3h,以70%、80%、90%、95%的乙醇各脱水3h,无水乙醇脱水两次,每次20min,此后以无水乙醇和二甲苯的混合液处理10min,二甲苯处理4min,进行透明。60℃埋入石蜡中。切片,37℃恒温箱中烤片,常规脱腊至水后,以蒸馏水配制的3%H2O2,室温下泡5~10min以灭活内源性酶,再以蒸馏水洗3次。再将切片泡入0.01M的枸橼酸盐缓冲液中,电炉加热至沸腾后断电,间隔5min后,反复2次,冷却后以0.1M的磷酸盐缓冲液洗涤2次。此后滴加正常山羊血清封闭液,室温保持20min。甩去多余液体,滴加一抗,4℃过夜。0.1M的磷酸盐缓冲液洗涤3次后,滴加生物素化山羊抗小鼠1gG,20~37℃,30min,0.1M的磷酸盐缓冲液洗涤3次后,用3,3一二氨基苯联胺显色5min,蒸馏水洗涤。最后以苏木素复染30s,脱水,透明,封片。光镜下观察统计背海马和齿状回内含淀粉样前提蛋白神经元的个数。

4、统计学方法

采用DAS1.0软件进行统计学分析,计量资料采用(X±S)表示,采用双因素方差分析,组间两两比较采用q检验,以p<0.05为差异有统计学意义。

结果

1、芹菜甲素对痴呆大鼠学习记忆能力的影响

与正常组相比,模型组大鼠的主动回避反应次数在训练的各天没有明显差异,均与模型组比较,芹菜甲素高、低两个剂量组大鼠的主动回避反应次数在训练的各天升高均有显著性差异。结果表明,三氯化铝可明显损害大鼠的学习记忆过程,芹菜甲素对痴呆模型大鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用。

2、芹菜甲素对痴呆大鼠背海马和齿状回内β-APP阳性神经元的作用

与正常对照组相比,模型组大鼠背海马和齿状回内β-APP阳性神经元明显增加。与模型组比较,芹菜甲素高、低两个剂量均可使大鼠背海马和齿状回内β-APP阳性神经元明显减少。

用慢性铝中毒的方法建立老年学习记忆障碍模型是研究老年性痴呆较为理想的模型之一。国内有学者研究表明,三氯化铝可明显降低大鼠的回避反应率,抑制回避反应的保留。铝可进入脑内取代钙和镁离子,同氨基酸链上的谷氨酸或精氨酸的羧基结合形成谷氨酸铝盐或精氨酸铝盐的稳定复合物而沉积于脑内,引起双螺旋纤维蛋白异常磷酸化反应,形成神经元缠结,引起Aβ的形成而产生老年斑最终导致神经元死亡。而Aβ由β-APP产生,因此可以通过抑制β-APP的产生而达到治疗老年性痴呆的目的。海马与学习记忆有密切的联系,海马中的胆碱能系统、单胺能系统、氨基酸能系统均为与学习记忆密切相关的中枢神经递质系统,这些系统递质的正常传递有赖于海马神经元的正常功能,三氯化铝可使大鼠海马尤其是背海马和齿状回内神经元死亡,大鼠学习记忆能力降低。本研究结果表明,芹菜甲素可以有效对抗三氯化铝所致的老年性痴呆大鼠学习记忆能力的降低,具有明显的促智作用,可明显减少痴呆大鼠背海马和齿状回内β-APP阳性神经元的个数,对背海马神经元有一定的保护作用,但其确切的机制有待于进一步研究。