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用三氯化铝对戊二醛(GA)处理的牛心包瓣进行改良处理的研究

返回列表 发布日期:2016年11月22日 来源:www.sanlvhualv.com 浏览:4029

我们应用三氯化铝对戊二醛(GA)处理的牛心包瓣进行改良处理,探讨处理后热收缩温度、力学特性及在大鼠皮下钙化情况,结果报道如下。

材料与方法

1.牛心包获取及分组处理:取3~4岁小牛新鲜心包,4℃生理盐水冲洗后剔除表面结缔组织。4小时内行以下分组处理.①GA组;新鲜心包浸入4℃o.6%GA(pH7.4)内,24小时后移入4℃0.2%GA(pH7.4)中,3周后待实验.②AICl3改良组:GA处理后心包片经0.9%生理盐水漂洗3×10分钟后浸入O.lMAICl3(pH3.O)溶液中(25—30℃)48小时后实验待用。③PBS组;新鲜心包浸入4℃磷酸缓冲液(PBS),(pH7.4)内,实验待用。

2.热收缩温度测定:SW-1型收缩温度测定仪测定各组心包热收缩温度。

3.力学分析:按Lee方法行力学分析,(Ml00型电子千能试验机,日本)测量。①10、20、60、100秒应力保留值(Stessremaining'SR=Q(t)/Q(t=0)×100%,Q(t=O)为负荷600g时初始应力值,Q(t)为各时间段应力值)。②断裂极限拉应力(Ultimatetensilestrength,UTS)和断裂应变(Strainatfracture,SF-(△L/Lo)×100%,La为心包片初始长度,△L一断裂时长度-Lo)。

4.大鼠皮下埋植钙化实验:取刚断奶Wistar大白鼠(4—5周龄,50—70g,雌雄不限),随机以时间段分组(埋植后7、21、60、90天)编号,按Levy方法行大鼠背部皮下埋植。普食饲养7、、21、60、90天处死大鼠行以下检测;①钙铝定量:各时间段心包片取出后,日立180-80Zeem原子吸收光谱测定各组钙含量及三氯化铝改良处理前后各时间段心包Al3+含量。②组织学观察;取各组埋植前后备时间段心包各一块行HE及Van-kossa染色,光镜观察。取埋植前及埋植后90天心包片行透射电镜观察。

5.统计方法:各组数据以均数土标准误表示,以汉化SAS统计软件包行F及q检验.P<0.05为差异显著,P

1.热收缩温度测定:AICl3改良处理心包的热收缩温度较GA处理组心包收缩温度高,但无统计学意义(P>0.05),与PBS组比较,两处理组热收缩温度均有极显著提高(P<0.01)。

2.力学分析结果:见表1,三氯化铝改良组与GA组各时间段应力保留值以及极限拉应力与断裂应变均显著高于PBS组(P<0.01),三氯化铝改良组与GA组心包片各力学指标均无统计学差异(P>0.05)。
表 1 各组应力保留值( S K ) ( %) 及极限拉应力( U ST ) (M p a ) 和断裂应变( S F ) ( %)

3.钙化结果:(1)钙含量测定:如表2,常规GA处理组牛心包在大鼠皮下钙含量进行性增加,三氯化铝改良处理则极显著抑制这种钙化发生。自皮下埋植第21天起,三氯化铝改良组心包钙含量极显著低于GA组(P<0.01)。(2)埋植前各组心包在光镜HE、Von-kossa染色下无明显差异,埋植90天HE、Von-kossa染色揭示GA组心包发生广泛钙化,透射电镜揭示GA组心包胶原本身,胶原间质及心包表面均发生钙化,其形态呈片状、针状,与胶原纤维走型一致,PBS组,三氯化铝改良组未发生钙化。
表2  各组心包埋植前后钙含量

4.三氯化铝改良组心包三氯化铝处理前后铝含量有极显著差异(P<0.01),在大鼠皮下90天内,AI3+无明显变化(P>0.05)。

讨论

三氯化铝改良处理生物瓣机理目前尚不清楚,可能的机理是
1.Al3+与胶原蛋白羧基铬合降低负电性,减少钙离子结合。
2.Webb认为Al3+竞争抑制Ca2+与磷结合,从而抑制晶核生长。热收缩温度是生物材料交联度的一个间接度量,本实验中Al3+处理可提高生物瓣收缩温度,但与GA组比较无统计学差异,与可能因GA与胶原纤维胶联密度大,Al3+在胶联作用上贡献不大。

本实验结果表明:三氯化铝改良处理可有效抑制钙化发生,且不减低GA处理后牛心包瓣良好的力学特性,Al3+与牛心包结合紧密,在大鼠皮下埋植90天内未见明显丢失,可稳定地发挥其抗钙化作用。